单四极杆液相色谱质谱联用仪-使用SQ910LC-MS同时测定7种大环内酯类药物的方法
一、方法原理
7 种大环内酯类药物（涵盖 14-16 元环结构）具中等极性与弱碱性，痕量残留需高特异性检测。本方法基于萃取净化 - 单四极杆液质联用技术：
- 分离富集：食品基质采用乙腈提取 - 除脂净化，水样通过固相萃取柱富集，去除蛋白质、脂类等干扰物；
- 检测定量：反相色谱柱分离后，经 SQ910 的电喷雾离子源电离，以选择离子监测（SIM）模式靶向捕获准分子离子峰，结合外标法或内标法定量；
二、仪器与试剂
（一）核心仪器
- 辅助设备：高速冷冻离心机（15000r/min）、全自动固相萃取装置、氮吹浓缩仪、0.22μm 有机相滤膜、棕色样品瓶。
（二）关键试剂
- 色谱纯试剂：甲醇、乙腈、甲酸（质谱级）、正己烷；
- 标准品：7 种大环内酯类药物（红霉素、阿奇霉素、克拉霉素、罗红霉素、麦迪霉素、乙酰螺旋霉素、地红霉素，纯度≥99%）；
- 内标物：红霉素 - d7（纯度≥98%，可选）；
- 其他：HLB 固相萃取柱（200mg/6mL）、无水硫酸钠（550℃灼烧 4h）、磷酸二氢钾（调节 pH）。
三、实验步骤（分基质示例）
1. 样品前处理
（1）猪肉样品（食品基质）
- 称取 2.0g 匀浆样品，加 10mL 乙腈，涡旋 2min，超声提取 15min；
- 加入 5g 无水硫酸钠，涡旋脱水，12000r/min 离心 5min，取上清；
- 上清加 5mL 正己烷涡旋除脂，弃上层，下层 40℃氮吹至近干，用甲醇定容至 1mL，过膜待检。
（2）地表水样品（环境基质）
- 取 500mL 水样，加甲酸调 pH 至 3~4，过 0.45μm 滤膜；
- SPE 柱依次用 5mL 甲醇、5mL 超纯水活化，水样以 3mL/min 流速上样；
- 5mL 5% 甲醇水溶液淋洗，负压抽干，用 8mL 甲醇分 2 次洗脱；
- 洗脱液氮吹浓缩至 1mL，加入内标，过膜待检。
2. 仪器条件设置
- 液相色谱：
- 色谱柱：C18 反相柱（250mm×4.6mm×5μm）；
- 流动相：A 相（0.1% 甲酸水溶液）、B 相（甲醇）；
- 梯度程序：初始 40% B，8min 升至 85% B，保持 4min，流速 1.0mL/min；
- 柱温 35℃，进样量 20μL。
- 质谱：
- 电离模式
- SIM 监测离子
- 溶剂延迟
3. 标准曲线与测定
- 配制 0.5~200ng/mL 系列标准溶液，绘制标准曲线，R² 需≥0.998；
- 样品与空白（基质经相同前处理）交替测定，外标法计算含量，内标法校正基质效应。
四、方法验证数据
- 线性关系：7 种药物在 0.5~200ng/mL 范围内线性良好，R² 均＞0.998；
- 检出限与定量限：食品基质 LOD 0.1~0.3μg/kg，LOQ 0.3~1.0μg/kg；水样 LOD 0.05~0.1ng/L，LOQ 0.15~0.3ng/L；
- 精密度：同一浓度样品平行测定 6 次，RSD≤8%；
- 准确度：加标浓度 0.5~50μg/kg（食品）、1~20ng/L（水样）时，回收率 80%~110%。
五、实际应用场景
- 食品监管：畜禽肉、水产品中大环内酯类兽药残留筛查，符合 GB 31650-2019 要求；
- 环境监测：地表水、污水中药物残留检测，支撑污染溯源；
- 药品质控：抗生素制剂中有效成分含量测定与杂质检查。
六、关键注意事项
- 样品稳定性：采集后立即 - 20℃冷冻，避免大环内酯类水解，48h 内完成前处理；
- SPE 柱活化：确保柱床全程湿润，干燥会导致吸附效率下降 30% 以上；
- 仪器维护：每周清洗离子源，每 200 针校正质量轴，避免离子抑制；
- 基质校正：复杂基质（如高脂肪样品）需采用基质匹配标准曲线消除干扰。
